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F-TOP10 感受態(tài)細(xì)胞

起訂量 (瓶)價格

1-10￥2350 /瓶

≥10￥1250 /瓶

品牌：帛科

產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)

貨號：BK-G63251

發(fā)布日期： 2021-02-21
更新日期： 2025-03-31

發(fā)送咨詢信息

產(chǎn)品詳請

產(chǎn)地	進(jìn)口、國產(chǎn)
保存條件	低溫冷藏
品牌	帛科
貨號	BK-G63251
用途	產(chǎn)品僅用于科研
組織來源	詳見說明書
細(xì)胞形態(tài)	詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞	否
CAS編號
保質(zhì)期	詳見說明書
器官來源	詳見說明書
免疫類型	詳見說明書
品系	詳見說明書
生長狀態(tài)	詳見說明書
物種來源	詳見說明書
包裝規(guī)格	100ul20 100ul100
純度	%
是否進(jìn)口	是

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：F-TOP10 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：100ul*20 100ul*100
分類：克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗研究）
儲存條件: -70℃保存，必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月。
外觀:（性狀）干冰運輸，單加10kg干冰費
單位: 袋

注意事項：

1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽性對照）能長出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個菌都沒長出來，重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個陰性對照，確定酶切是否完全。同時連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時間過長，轉(zhuǎn)化效率會有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

周效磺胺(磺胺多辛)sulphadoxine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 化微粒體1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量檢測試劑盒20 Humansolubleierleukin-2receptor,IL-2sRαELISAkit 人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

周效磺胺(標(biāo)準(zhǔn)品)sulphadoxine質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatImmunoglobulinM,IgMELISA試劑盒大鼠球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T Humanneuophilicalkalinephosphatase,NAPELISA試劑盒人中性粒細(xì)胞堿性1酸酶(NAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鹽酸羅匹尼羅Ropinirole HCl質(zhì)量規(guī)格：>98.0% 小鼠粘蛋白4(MUC4)ELISA試劑盒，英文名： MUC4 ELISA Kit ELISAKitTNF-α豬壞死因子α規(guī)格：48T/96T

鹽酸羅哌卡因Ropivacaine 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,一水合物層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測試劑盒MonkeyLaminin,LNELISAKit 96T/48T Humanfetalsulfoslycoproteinaigen,FSAELISAKit人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

英文名稱Mouse17-KSELISAKIT小鼠17-同皮質(zhì)類(17-KS)規(guī)格：96T/48T 760961-03-3常春藤苷D品牌 Hederacoside D

產(chǎn)氣莢膜梭菌腸(Closidiumperfringenscpe)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20 36284-77-2常春藤皂苷B規(guī)格 Hederasaponin B

RatFreeTestoterone,F-TESTOELISA試劑盒大鼠游離睪同(F-TESTO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 465-99-6常春藤皂苷元 Hederagenin

小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒，英文名： histon-H2b ELISA Kit 140147-77-9朝藿定A1說明書 Epimedin A1

小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISA檢測試劑盒MouseFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit 96T/48T 110623-72-8朝藿定A品牌 Epimedin A

80321-69-3七葉膽苷XVII規(guī)格 Gypenoside XVII 組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

80286-58-4青蒿酸規(guī)格 Artemisic acid 組織AURORA-C激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

80154-34-3豆腐果苷 Helicid 組織AURORA-B激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

7-乙氧基莫諾苷規(guī)格 7-O-ethyl-morroniside 組織AURORA-A激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

79916-77-1連翹脂苷A說明書 Forsythoside A 組織ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒50

F-TOP10 感受態(tài)細(xì)胞操作方法：

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

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